Mokfu.site

Основы медицинских знаний

Методы исследования коагуляционного гемостаза



Приготовление АПТВ – реагента: концентрированный буфер трис НСl и концентрированную суспензию каолина количественно перенести из флаконов в мерный цилиндр и общий объем довести дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочую суспензию каолина. Для приготовления AЧТВ - реагента смешать в пробирке 0,1 мл раствора кефалина с 3,0 мл рабочей суспензии каолина.

Приготовление рабочего раствора хлорида кальция: в день исследования, в соответствии с потребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем концентрированного раствора + 19 объемов воды).

Проведение анализа:

1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл исследуемой плазмы и прогреть ее при +370С в течение 1 мин.

2. В кювету добавить 0,1 мл AЧТВ - peaгeнтa, имеющего комнатную температуру.

3. Через 3 мин к смеси добавить 0,1 мл рабочего раствора хлорида кальция и зарегистрировать время свертывания.

AЧТВ в нормальной плазме составляет 28-38 с.

Определение тромбинового времени (Тромбо – тест)

Принцип метода:

заключается в определении времени свертывания плазмы крови под влиянием тромбина стандартной активности.

Состав набора: тромбин (лиофильно высушенный, 6-8 ед NIH во фл.) - 4 фл.; контрольная плазма (лиофильно высушенная) - 1 фл.

Оборудование, материалы, реагенты:

коагулометр; пипетки вместимостью 0,1 - 1,0, 10,0 мл; вода дистиллированная;

Приготовление анализируемых образцов:

венозную кровь центрифугируют при 3000 – 4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. получают бедную тромбоцитами плазму.

Подготовка реагентов к работе:

Разведение тромбина: в один из флаконов с тромбином внести необходимое количество дистиллированной воды (см. таблицу) и растворить содержимое при комнатной температуре и легком покачивании в течение 2-3 мин.

Ориентировочные значения нормы тромбинового времени свертывания

Объем дистиллированной воды на флакон с тромбином, мл

Время свертывания, сек.,

при коагулометрическом

определении

2,0

11-14

3,0

15-19

5,0

20-29

Разведение контрольной плазмы:

во флакон с контрольной плазмой внести 0,5 мл

дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре и легком покачивании в течение 3 мин.

Проведение анализа:

1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл контрольной плазмы и прогреть ее при +370С в течение 1 мин.

2. В ту же кювету добавить 0,1 мл раствора тромбина и зарегистрировать время свертывания.

Исследование плазмы больного выполняется аналогично.

Чтение результатов:

результат выражают в секундах, сравнивают время свертывания контрольной и исследуемой плазмы. В норме ТВ составляет 14 – 17 с.

Определения концентрации фибриногена (Квик – Фг – тест)

Принцип метода:

образовавшийся после свёртывания плазмы крови фибрин быстро высушивается и по его весу определяется содержание фибриногена в плазме.

Состав набора:

тромбопластин, 1 г – 2 фл.; хлорид кальция (концентрированный 20:1 раствор, 5,54%), 10 мл – 6 фл.; буфер трис – НСl (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл – 2 фл. Перейти на страницу: 1 2 3