Принцип метода: скорость образования окрашенного комплекса креатинина с пикриновой кислотой в щелочной среде пропорциональна концентрации креатинина в пробе.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови. Гемолизированная сыворотка или плазма крови для анализа не пригодна.
Состав набора:
Реагент №1. Пикриновая кислота (100 мл).
Реагент №2. Натрий едкий (100мл).
Калибратор – раствор креатинина 17,7ммоль/л (2мл).
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
Рабочий реагент: для исследования смешайте реагенты №1 и №2 в соотношении 1:1. нагрейте рабочий реагент до температуры 370С.
Рабочий раствор калибратора: для исследования разведите калибратор в 100 раз дистиллированной водой. Полученная концентрация 177мкмоль/л. Процедура анализа:
Анализ проводится в термостатируемой (370С) фотометрической кювете с длиной оптического пути 1см при 505нм против воздуха. В кювете смешайте рабочий реагент и исследуемый материал или калибратор в соотношении 5:1 (например, 1мл рабочего реагента и 0,2мл исследуемого материала). Через 1 минуту измерьте оптическую плотность (Е1). Повторите измерение точно через 60сек (Е2). Вычислите величину ΔЕ=Е2 – Е1.
Расчет концентрации креатинина (С):
В сыворотке (плазме)
;
ΔЕпробы – изменение оптической плотности исследуемой пробы,
ΔЕкалибр – изменение оптической плотности калибровочной пробы,
177мкмоль/л – концентрация креатинина в разведенном калибраторе,
Если концентрация креатинина превышает 880мкмоль/л в сыворотке (плазме) разведите исследуемые образцы в 5 раз физиологическим раствором и повторите определение; результат умножьте на 5.